大阳城集团72138(国际)有限公司-Wolfram Alpha

转化医学服务平台

大阳城集团72138转化医学平台拥有经验丰富的专业化技术团队，从药物靶点的作用机制和生物标志物的临床应用出发，以生物标志物的发现和验证为基础，结合多种不同的技术平台和先进的仪器，创建了多种生物分析方法，降低了药物研发的成本和时间，为不同类型的药物、不同类型的药企和不同研发阶段的项目提供多元高效的服务。

转化医学以药物研发过程中生物标志物为核心，以精准医疗提高药物研发临床应答率为目标，覆盖从早期靶点确认——临床前R&D ——临床I、II、III期Development，到上市后的药物检测，通过不同阶段的研究实现药物研发的闭环。
- 01
  药物发现
- 02
  CMC研究
- 03
  临床前研究
- 04
  临床研究
- 05
  上市
随着基因组学、蛋白质组学和代谢组学等多组学分析技术不断地发展，治疗方式已经从传统小分子扩展到多肽、蛋白、抗体、基因疗法、细胞疗法等多种新型技术。尽管有这些新技术，但仍有大量疾病的致病原因还无法彻底明白。
转化医学将生物医学观察和研究转化为改善健康的干预措施的过程，加速了基础研究、新药开发的和临床转化的进程，成为精准靶向治疗的加速器。转化医学研究利用各种研究手段，确定靶点与疾病发生发展的关系、验证和探索药物的作用机制、发现生物标志物并开发伴随诊断产品，以及为临床研究开展筛选最合适的人群和适应症等，从而提高新药研发效率和成功率。
将转化医学里程碑叠加到药物开发阶段^[1]
大阳城集团72138请回答：什么是转化医学

服务平台

细胞因子和生物标志物检测

大阳城集团72138可以为广大医药研发人员提供细胞因子及生物标志物的检测服务，其生物分析部基础设施齐全、仪器设备先进，拥有的流式CBA、MSD、Luminex系统等高端技术平台可以进行各种single plex或multiplex多形式的细胞因子和生物标志物的检测。

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生物分析技术服务平台

大阳城集团72138生物分析部可以为客户提供小分子药物、大分子生物制品、生物标志物的筛选与开发，以及临床前和临床阶段的研究服务。可以提供符合FDA/NMPA GLP的生物技术药物生物分析服务，以支持蛋白药物、抗体药物、疫苗、生物标志物、细胞和基因治疗药物的早期开发，及其临床前研究和临床研究。

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流式细胞技术平台

截至目前，大阳城集团72138承接的流式检测项目已经近400项，包括细胞表面抗原表达的流式检测；细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡等的流式分析；动物外周血及各免疫器官检测；移植瘤模型流式检测等。

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免疫组化技术平台

免疫组化简介
免疫组化，也称免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。是指应用免疫学基本原理即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究。根据抗原抗体反应和化学显色的原理，组织切片或细胞样本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与二抗反应，DAB进行显色，进而进行分析。
主要步骤
组织处理、固定、切片抗原修复除去内源性过氧化物酶封闭一抗、二抗孵育检测复染

组织处理、固定、切片

组织固定可保存抗原，防止采集的组织自溶和坏死。组织包埋可在切片过程中对组织提供支撑，使切片更坚实。

	石蜡切片	冰冻切片
固定	包埋前：甲醛	切片前或切片后：甲醛、甲醇、乙醇或丙酮
切片	切片机	冰冻切片机
储存	室温下储存多年	-80 °C下储存1年（-190°C下储存时间更长）
优势	容易操作，不会损坏切片	♦ 保留酶的功能和抗原性 ♦ 实验流程简短（通常不需要冗长的固定步骤）
局限性	♦ 过度固定会掩盖抗原表位，进而增加抗原修复的需求 ♦ 处理时间长：在梯度酒精和二甲苯中逐步脱水，以便于石蜡渗透。	♦ 如果没有快速冷冻组织”可能会形成冰晶，从而破坏组织结构 ♦ 冰冻切片通常比石蜡切片厚，可能会导致分辨率低、图像差 ♦ 可能需要阻断内源活性酶。

石蜡切片 vs冰冻切片

处理流程

抗原修复

对甲醛固定的组织切片进行抗原修复，以暴露抗原位点，从而使抗体结合。

	热诱导的抗原表位修复	蛋白水解酶诱导的抗原表位修复
优势	抗原表位的修复更温和，参数更可控。	适用于较难修复的抗原表位。
ph值	通常使用pH6的缓冲液，但碱性缓冲液也在广泛使用。必须通过实验确定	pH值通常为7.4。
温度	约95°C。	通常为37°C
孵育时间	10-20分钟	10-15分钟
缓冲液组分	取决于靶抗原所需的pH 值。常用的缓冲液包括柠檬酸钠、EDTA和Tris-EDTA	酶(如胃蛋白酶、蛋白酶K 或胰蛋白酶)的中性缓冲液。
注意事项	微波炉加热可能会导致抗原修复不均匀。剧烈沸腾会导致脱片(组织与载玻片分离）。	酶修复有时会破坏切片的形态- 浓度和时间需要优化

抗原修复的主要方法

封闭
用血清或BSA封闭，防止抗体的非特异性结合，并降低背景和潜在的假阳性结果。
❖ 蛋白封闭：使用血清或BSA 进行封闭对于防止抗体与组织或Fc 受体（与抗体恒定区（Fc）结合的受体）发生非特异性结合至关重要。二抗种属来源的血清是很好的封闭试剂。使用牛血清白蛋白（BSA）或酪蛋白，可用于阻断非特异性抗体结合。
❖ 生物素封闭：在使用基于亲和素/生物素的检测系统时，阻断内源性生物素，因为内源性生物素存在于许多组织中，特别是肾脏、脾脏、肝脏和大脑中。用亲和素与组织孵育，阻断内源生物素，然后用外源生物素孵育，以阻断亲和素分子上额外的生物素结合位点。
检测
❖ 酶显色法：显色检测使用酶能够催化可溶性底物产生有色沉淀。这些酶通常偶联在二抗上，也可以偶联在一抗上用于直接检测。最常用的酶有HRP 和AP，前者将DAB 转化成棕色产物，后者将3-氨基-9-乙基咔唑 (AEC) 转化成红色产物。显色检测通常比荧光检测更灵敏。此外，不同于荧光染料，有色沉淀物有光稳定性，因此染色切片能够保存多年。荧光检测需要使用专业荧光显微镜和滤光片，显色检测仅需使用标准显微镜。然而，显色检测的孵育和封闭步骤比荧光法更多，时间也更长。
❖ 荧光法：荧光检测（免疫荧光）是基于荧光基团被特定波长的光激发后发射波长较长的荧光的特性。荧光检测常常用于需要同时检测多种抗原的情况。荧光染料可以与一抗或二抗直接偶联，也可与链霉素亲和素偶联。
案例赏析：PD-L1, Ki-67, Her2, CD31, CD163, FoxP3
IHC Analysis of the expression of
a)PD-L1 from lung adenocarcinoma^[3]; b)Ki-67 from periampullary tumors^[4]; c)Her2 from lung tumor^[5]; d)CD31 from human gastric adenocarcinoma^[6]; e)CD163 (M2 TAM marker) from oral squamous cell carcinoma (OSCC)^[7]; f)FoxP3 from human glioblastoma^[8].

总结与展望

基于基因组学、蛋白组学、细胞组学及病理组学等综合性转化医学平台；高质量的研发管理团队；大阳城集团72138转化医学平台致力于为全球合作伙伴提供全方位生物标志物发现、靶点验证、伴随诊断开发与商业化检测等一体化解决方案。
❖ 以ELISA、ECL（MSD), SIMOA（HD-X), Biacore 8K 技术构建的的蛋白质相互作用，蛋白水平生物标志物平台；
❖ 以流式细胞术（BD Symphony A3，BD Fortesssa, Beckman CytoFLEX S）为主构建的细胞水平生物标志物平台；
❖ 以荧光定量PCR技术构建的多重核酸水平生物标志物平台；
❖ 免疫组化（TAMs-IHC，FISH）技术构建的病理水平生物标志物平台等。

参考文献：
[1] Hugues Dolgos, et al. Translational Medicine Guide transforms drug development processes: the recent Merck experience. Drug Discov Today. 2016 Mar;21(3):517-26. doi: 10.1016/j.drudis.2016.01.003.
[2] Ying Xu, et al. A Selective Small-Molecule c-Myc Degrader Potently Regresses Lethal c-Myc Overexpressing Tumors. Adv Sci (Weinh). 2022 Mar;9(8):e2104344. doi: 10.1002/advs.202104344.
[3] Jonas J Heymann, et al. PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens. Cancer Cytopathol. 2017 Dec;125(12):896-907. doi: 10.1002/cncy.21937.
[4] Mark M Aloysius, et al. Predictive value of tumor proliferative indices in periampullary cancers: Ki-67, mitotic activity index (MI) and volume corrected mitotic index (M/V) using tissue microarrays. World J Surg. 2010 Sep;34(9):2115-21. doi: 10.1007/s00268-010-0681-3.
[5] Montse Verdu, et al. Cross-reactivity of EGFR mutation-specific immunohistochemistry assay in HER2-positive tumors. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 2015 Sep;23(8):565-70.
[6] Qingling Wang, et al. EPCR promotes MGC803 human gastric cancer cell tumor angiogenesis in vitro through activating ERK1/2 and AKT in a PAR1-dependent manner. Oncol Lett. 2018 Aug;16(2):1565-1570. doi: 10.3892/ol.2018.8869.
[7] Faustino J Suárez-Sánchez, et al. Macrophages in Oral Carcinomas: Relationship with Cancer Stem Cell Markers and PD-L1 Expression. Cancers (Basel) (IF: 6.13; Q1). 2020 Jul 2;12(7):1764. doi: 10.3390/cancers12071764.
[8] Qi Yue, et al. The prognostic value of Foxp3+ tumor-infiltrating lymphocytes in patients with glioblastoma. J Neurooncol. 2014 Jan;116(2):251-9. doi: 10.1007/s11060-013-1314-0. Epub 2013 Nov 26.[9] Christopher P Austin.Opportunities and challenges in translational science. Clin Transl Sci. 2021 Sep;14(5):1629-1647. doi: 10.1111/cts.13055.